雷公藤红素促进RIP1蛋白的去泛素化增强TNF-α对结肠癌细胞的凋亡诱导活性的研究

目的 探讨中药活性成分雷公藤红素对TNF-α体外抗结肠癌活性的影响并研究其机制。方法 用雷公藤红素联合TNF-α体外治疗结肠癌细胞系SW480，MTT法检测SW480细胞的细胞活力。SW480细胞用雷公藤红素联合TNF-α治疗后，Annexin V/PI染色法检测细胞的凋亡，Western blot法检测细胞caspase-8、caspase-9和caspase-3的活化和对CYLD蛋白表达的影响，并用免疫共沉淀法检测SW480细胞RIP1蛋白的泛素化水平。结果 雷公藤红素联合TNF-α对结肠癌细胞系SW480的细胞活力抑制率和凋亡诱导活性均显著高于雷公藤红素及TNF-α单治疗组。雷公藤红素联合TNF-α对SW480细胞caspase-8、caspase-9和caspase-3的活化显著高于雷公藤红素及TNF-α单治疗组，且两者联合治疗后，caspase-8的活化时间显著早于caspase-9和caspase-3。SW480细胞用雷公藤红素联合TNF-α治疗后，其RIP1蛋白的泛素化水平显著低于雷公藤红素及TNF-α单治疗组。进一步研究发现，雷公藤红素能显著诱导SW480细胞CYLD蛋白的表达，而TNF-α对CYLD的表达水平无影响，当用小干扰RNA沉默CYLD的表达后，雷公藤红素对TNF-α的协同效应丧失。结论 雷公藤红素通过促进RIP1蛋白的去泛素化增强TNF-α对结肠癌细胞的凋亡诱导活性