MiR-19反义核酸与CD133⁺HT29细胞亚群对多柔比星敏感性关系的研究

目的 探讨miR-19反义核酸与CD133+HT29细胞亚群对多柔比星敏感性的关系并研究其机制。方法 用RT-qPCR方法检测miR-19在结直肠癌细胞中的表达水平。流式细胞术检测miR-19反义核酸和多柔比星对HT29细胞系的CD133+细胞亚群种群比例的影响。MTT法检测miR-19反义核酸对多柔比星杀伤CD133+HT29细胞亚群能力的影响。利用生物信息学及Western blot法验证miR-19是否调节CD133+HT29细胞亚群中PTEN的表达。运用Western blot、免疫共沉淀、流式细胞术研究miR-19反义核酸影响多柔比星疗效的信号通路。结果 结直肠癌细胞系的miR-19表达水平显著高于正常结直肠上皮细胞系，并且CD133+细胞中的miR-19表达水平显著高于常规结直肠癌细胞。多柔比星体外单独治疗能提高HT29细胞系中CD133+细胞亚群的比例，然而联用miR-19反义核酸后CD133+HT29细胞亚群的种群比例显著下降。MTT结果表明miR-19反义核酸可显著增强多柔比星对CD133+HT29细胞亚群的杀伤活性。Western blot实验表明miR-19的靶基因可能为PTEN。MiR-19反义核酸可显著抑制CD133+HT29细胞亚群PI3K、AKT和Bad的磷酸化，增强Bad与Bcl-2和Bcl-xl的结合，从而提高CD133+HT29细胞亚群对多柔比星依赖的凋亡信号的敏感性，促进caspase-9和caspase-3的活化。结论 MiR-19反义核酸通过PTEN/PI3K/AKT/Bad途径提高CD133+HT29细胞亚群对多柔比星的敏感性