干制辣椒InDel-PCR反应体系的构建及应用

以干制辣椒叶片为试验材料，筛选适用于InDel-PCR(insertion-deletion-PCR)的DNA提取方法。采用单因素试验设计，对干制辣椒InDel-PCR反应体系进行优化，以及建立干制辣椒InDel的最佳反应体系和扩增程序，利用构建的InDel-PCR反应体系对InDel引物进行筛选。结果表明：植物基因组试剂盒较改良十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法提取的DNA质量高、杂质少，更适合InDel-PCR的应用；适用于干制辣椒的InDel-PCR反应体系总体积为15 μL，其中模板DNA 2.0 μL，正反向引物各1.0 μL，2×Go Taq R Colorless Master Mix 7.5 μL，其余用ddH2O补齐。扩增程序：94 ℃预变性5 min；94 ℃变性30 s，56 ℃退火30 s，72 ℃延伸45 s，30次循环；72 ℃延伸5 min。在上述PCR条件下从60对InDel引物中筛选出25对多态性好、稳定性高的引物