产反式-4-羟脯氨酸重组大肠杆菌的构建及优化

反式-4-羟脯氨酸为手性亚氨基酸，是一种被广泛应用于医疗、美容、化工、畜牧领域的生产原料。通过以下工作构建了1株能够高效表达反式-4-脯氨酸羟化酶基因的重组大肠杆菌：(1)使用JCAT软件优化反式-4-脯氨酸羟化酶的编码区基因序列，改变141个碱基(替换了138个同义密码子)，使其CAI指数由0.396 5优化至 0.927 7，C/G由73.626 3%优化至59.706 9%，优化mRNA延伸效率；(2)优化非编码区序列，选择色氨酸启动子并进行简化，使RBS区包含SD序列，在RBS区前添加g10-L翻译增强子，使用RNAstructure软件优化起始区序列的二级结构，增强mRNA的起始效率；(3)构建重组大肠杆菌DH5α/pUC-19-pH，优化宿主及质粒载体，最终得到的重组菌DH5α/pUC-19-pH比酶活达到0.010 8 U/mg