化学-渗透压法温和破碎处理下大肠杆菌细胞 胞内蛋白质的释放率

恰当的细胞破碎工艺是获取胞内蛋白质的必需环节，然而现有细胞破碎技术仍有较多不足。为了研究合适的细胞破碎方法，拟通过化学法与渗透压法的联用，建立化学-渗透压法温和高效破碎大肠杆菌细胞的新工艺。结果表明：(1)单用化学法处理大肠杆菌细胞，最高仅能释放37.3%的胞内蛋白质，而化学-渗透压法最高可以释放84？？2%的胞内蛋白质；对渗透压处理环节进行优化后，胞内蛋白质释放率提高至93.1%及以上；(2)以优化的化学-渗透压法释放重组原动蛋白2β(PK2β)工程菌细胞的胞内蛋白质，其中70.5%~80.2%重组PK2β呈可溶性，而超声法处理的样品中不含有可溶性重组PK2β，表明化学-渗透压法不仅简便高效、成本低廉，而且有利于保留可溶性重组蛋白质，而超声破碎法会导致可溶性蛋白发生变性沉淀而增加蛋白质分离的难度。综合分析可知，化学-渗透压法在基因工程及生物工程中具有良好的应用前景