山葡萄DFR基因全长cDNA的克隆与序列分析

应用RT-PCR和 SMART RACE等技术克隆山葡萄二氢黄酮醇4-还原酶基因的全长cDNA序列，结果表明，该基因全长1 362 bp，包括1 014 bp的完整开放阅读框，推测其编码337个氨基酸。该基因表达产物相对分子质量为37.50 ku，等电点为5.95，是稳定蛋白，不包含信号肽。蛋白质疏水性分析结果表明，DFR疏水性最大值为2.511，最小值为-2.267，平均值为-0.146，整体表现为亲水性。二级结构分析结果表明，DFR的二级结构主要以α-螺旋(35.31%)和不规则卷曲(46.29%)为蛋白最大量的结构元件。对不同植物DFR氨基酸序列进行多重比对发现，同源性较高，DFR与NADPH结合区域和底物结合区域都表现出高度保守。用推导的氨基酸序列与蛋白质数据库进行同源性比较，其氨基酸序列与欧亚种葡萄、大豆、矮牵牛等植物的DFR氨基酸序列两两比对的相似性系数分别为98%、76%、74%