弗氏柠檬酸杆菌SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR 诊断方法的建立及耐药性分析

根据GenBank中弗氏柠檬酸杆菌ompA基因序列，设计1对特异性引物，PCR扩增弗氏柠檬酸杆菌ompA基因片段，T克隆到pMD-18T载体上构建标准阳性质粒。通过SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR反应条件优化，建立弗氏柠檬酸杆菌SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR诊断方法，结果显示重复性好、特异性高，灵敏度可达1.0×101拷贝/μL，说明建立的弗氏柠檬酸杆菌SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法适合于弗氏柠檬酸杆菌病临床疑似病料样品的快速诊断。对分离得到的83株弗氏柠檬酸杆菌进行药敏试验，结果表明冷水鱼养殖中耐药性问题日益严重