大头典竹ISSR反应体系建立与优化

以大头典竹叶片为材料，采用单因素分析法和正交设计直观分析法，对影响PCR扩增效果的Mg2+、dNTPs、TaqDNA聚合酶、引物、模板DNA含量这5个PCR反应体系主要成分以及退火温度和循环次数进行筛选。通过研究建立了适合大头典竹的ISSR-PCR反应体系：20 μL反应液中含2.5 mmol/L Mg2+，0.25 mmol/L dNTPs，1.25 U TaqDNA聚合酶，0.6 μmol/L引物，10 ng模板DNA，2 μL 10×Buffer，10.55 μL ddH2O。相应反应程序为94 ℃预变性 5 min；94 ℃ 变性45 s，54.5 ℃退火30 s，72 ℃延伸90 s，35个循环；72 ℃延伸10 min，4 ℃保存。应用建立的优化反应体系成功地筛选出16条多态性较高的引物，表明该体系具有较高稳定性、重现性、适用性，可较好地应用于大头典竹不同地理种源间的遗传多样性研究