人LOXL2启动子的鉴定与初步分析

LOXL2（lysyl oxidase like 2）是赖氨酰氧化酶（LOX）家族的一个重要成员，不仅可促进细胞外基质中胶原蛋白和弹性蛋白的交联，而且在转录调控、细胞信号转导以及细胞粘附等生物学过程中也有重要作用。多篇研究表明，LOXL2在多种肿瘤中高表达，且与多种肿瘤细胞的增殖迁移等生物学行为密切相关。LOXL2的表达调控机制目前仍不清楚。为了进一步研究LOXL2的转录调控机制，本研究克隆鉴定了LOXL2的启动子。首先通过数据库对LOXL2基因结构及潜在启动子区域进行了分析，进而以人的基因组DNA为模板，通过PCR定向克隆策略，构建了5个长度不同并覆盖LOXL2基因转录起始位点附近约1.7 kb的LOXL2基因启动子荧光素酶报告基因重组体。启动子活性分析结果表明，与对照组相比，5个重组体均具有启动子活性(P<0.05)，提示LOXL2基因核心启动子定位于转录起始位点附近约185 bp的区域内。转录因子结合位点分析结果表明，LOXL2基因启动子缺乏典型的TATA盒，但含有GC盒以及Sp1、NFkB等潜在的转录因子结合位点。外源转染Sp1表达质粒能显著增强LOXL2基因启动子的活性（P<0.05），提示Sp1能直接激活LOXL2的转录