2′-氟取代对T7 DNA连接酶连接效率的阻滞

为更好地理解连接酶的接合机制，研究了2′-氟取代核苷酸（2′-fluorinated nucleotide, FN）对T7 DNA连接酶接合特性的影响。利用分子信标的荧光信号变化来检测连接酶接合活性。结果显示，在连接酶作用的分子信标缺口处的5′端和3′端分别进行F取代时，对T7 DNA连接酶的接合效果分别阻滞（48.7±6.7）%和（70.6±4.0）%。在取代同时发生在5′端和3′端时，接合效果被阻滞（76.6±1.3）%。动力学参数的回归显示，FN取代会导致连接反应最大速率（Vmax）降低，同时导致米氏常数Km增大，说明酶和底物之间的亲和力在取代后减小。缺口两端的碱基错配也对酶接合反应效果产生一定的阻滞效应。本研究的结果和结论使对氟取代后，T7 DNA连接酶的接合特性有了更进一步的认识，为更好地应用T7 DNA连接酶接合活性提供有力的实用依据