设计特定序列的引物提高依赖解旋酶恒温扩增效率

依赖解旋酶恒温扩增（helicase-dependent amplification，HDA）是一种新型的恒温DNA体外扩增方法，具有反应原理简单，反应温度恒定等优点，被广泛地应用于核酸分子检测。但是依赖解旋酶恒温扩增仍面临着双链DNA解旋反应效率不高导致的扩增效率不够高、灵敏度低的问题。为了进一步提高依赖解旋酶恒温扩增技术中双链DNA模板的解旋效率，在本研究中，5?端带有不同长度不同序列的寡聚核苷酸引物，被用于依赖解旋酶恒温扩增反应，以研究DNA片段的末端序列对依赖解旋酶的双链DNA解旋反应，乃至整个扩增反应效率的影响。结果表明，只有5?端带有poly(A)序列的核酸引物明显促进了扩增反应效率，其中6个A的长度的5?端组成的引物对恒温扩增的促进作用最好，扩增产物比不带任何特定序列的原引物提高了约5.3倍。相比之下，带有poly(AC)或者poly(C)序列的引物，在一定程度上阻碍依赖解旋酶恒温扩增反应效率。因此，本研究证明了特定设计的末端序列，可以提高依赖解旋酶恒温扩增反应效率