水稻齿叶矮缩病毒Pns10蛋白在水稻原生质体内的表达

摘要 【目的】水稻齿叶矮缩病毒(Rice ragged stunt virus, RRSV) Pns10蛋白在介体昆虫细胞内可形成类似病毒原质(viroplasm)的内含体，是RRSV侵染介体所必需。然而Pns10蛋白在水稻寄主中是否具有类似功能及其表达情况如何未见报道。【方法】利用大肠杆菌系统表达Pns10蛋白，免疫家兔制备多克隆抗体；通过水稻原生质体病毒侵染体系，利用免疫荧光技术分析Pns10蛋白在水稻原生质体内的分布情况，利用实时定量PCR技术和Western blot技术分别检测Pns10 RNA和Pns10蛋白在水稻原生质体内的积累情况。【结果】将Pns10基因克隆到Gateway系统原核表达载体pDEST17中，IPTG诱导表达成功后，制备融合蛋白抗血清。Western blot检测显示，该抗血清可检测感病水稻叶片中的Pns10蛋白。病毒侵染水稻原生质体后， Pns10蛋白可形成类似病毒原质的内含体；Pns10 RNA在病毒接种8 h后开始积累，24 h后达到最大值，随后开始下降；Pns10蛋白在24 h后开始表达，之后维持较高水平，60 h后略有下降。【结论】成功获得了Pns10抗血清；Pns10在水稻原生质体内成功表达，可形成类似病毒原质的内含体，并且Pns10 RNA的表达先于其蛋白的表达