水稻纹枯病菌RsPhm基因的克隆及其表达分析

摘要 【目的】为了阐明苯酚2-单加氧酶基因(RsPhm)在水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani AG-1ⅠA)黑化中的功能,【方法】采用常规PCR和RT-PCR技术对该基因进行克隆和生物信息学分析，通过荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测在儿茶酚胁迫下该基因的相对表达量。【结果】生物信息学分析结果表明， RsPhm基因的DNA和cDNA全长序列分别为2 628 bp和1 983 bp，编码660个氨基酸。系统进化树分析显示，RsPhm基因在立枯丝核菌(R. solani)不同融合群中具有较近的亲缘关系，在不同真菌之间在进化上具有一定保守性。通过qRT-PCR技术分析了在不同浓度儿茶酚胁迫下水稻纹枯病菌RsPhm基因的转录表达情况。外源儿茶酚能提高RsPhm基因的表达量，在12.5 μg/mL浓度下表达量最高，极显著上调35.7倍，在25 μg/mL和50 μg/mL浓度下表达量分别上调19.1倍和28.4倍，但在100 μg/mL浓度下表达量仅上调2.1倍。【结论】获得了RsPhm 基因全长序列，了解了其基本生物学信息，明确了其在儿茶酚胁迫下的表达模式。研究结果为科学、系统地阐明水稻纹枯病菌RsPhm基因调控黑色素形成机制奠定了理论基础