蝎毒多肽提取物对白血病细胞株K562/A02荷瘤鼠耐药性的影响

摘要 目的 探讨蝎毒多肽（peptide extract from scorpion venom,PESV）逆转白血病干细胞（leukemiastem cells, LSC）在体内多药耐药（multidrug resistance, MDR）的分子机制。方法 以多药耐药的K562/A02细胞株成模白血病BALB/c裸鼠为例，成模鼠随机分为6组：模型对照组、阿霉素（ADM）组、PESV组、ADM+PESV（H）组、ADM+PESV（M）组、ADM+PESV（L）组。模型对照组给予等体积0.9%氯化钠溶液腹腔注射，其余各组予相应剂量ADM和（或）PESV腹腔注射，连续给药14天。第21天观察各组裸鼠移植瘤生长情况，分别检测瘤块中LSC：细胞膜上P-gp的表达，细胞质中ALDH、PI3K的变化及细胞核中MDR1、NF-κB的活性。结果 K562/A02细胞经免疫磁珠分选前后的CD34+CD38-细胞比率和IC50值分别为31.5%、（60.33±10.68）μg/ml和92.8%、（58.33±9.72）μg/ml，分选后细胞干性显著提高，而耐药性无差异性损失；各组造模裸鼠成瘤率100%。瘤体中LSC：流式细胞仪检测细胞膜上P-gp表达结果：检测对照组89.8%、ADM组91.9%、PESV组88.4%、ADM+PESV（H）组53.9%、ADM+PESV（M）组78.0%、ADM+PESV（L）组78.7%；半定量RT-PCR检测MDR1 mRNA的表达：PESV组＞ADM+PESV（L）组＞ADM+PESV（M）组＞ADM+PESV（H）组＞ADM组；免疫组织化学检测ALDH，显示灰度值ADM组＞PESV组＞ADM+PESV（H）组＞ADM+PESV（M）组＞ADM+PESV（L）组；Western blot检测PI3K分子与Elisa检测NF-κB因子结果一致，在ADM组、PESV组表达上调，在ADM+PESV组中表达下调，下调强度与PESV剂量呈正相关。结论 PESV具有下调白血病干细胞膜上P-gp，细胞质内ALDH、PI3K及细胞核中MDR1、NF-κB的表达水平，增强了白血病K562/A02干细胞在体内对ADM的敏感度，逆转其多药耐药特性