通用引物SPF1/GP6++与SPF1/GP6+聚合酶链式反应检测多型别人乳头瘤病毒敏感度的比较

摘要 目的 对比通用引物SPF1/GP6++与SPF1/GP6+ PCR两种方法检测人乳头瘤病毒（HPV）的敏感度和感染型别范围。方法 以包含HPV16全长DNA序列的质粒为模板，应用HPV L1基因型别特异性引物进行PCR扩增，获得15种型别HPV模拟靶基因序列并克隆入pEASY-T1载体，将梯度稀释的重组质粒掺入50 ng正常人基因组DNA，模拟各型别HPV感染的待测样本，对比SPF1/GP6+和SPF1/GP6++两组通用引物的检测敏感度。进一步在68例人宫颈癌组织DNA样本中进行对比验证。结果 与SPF1/GP6+PCR比较，SPF1/GP6++ PCR对HPV11，31，34，39，51，52，53，56，58，61和66型别的检测敏感度提高了1到2个数量级，对于HPV16，18，33和35常见感染型别的检测敏感度相似。应用SPF1/GP6++ PCR检测宫颈癌组织HPV感染的总阳性率为98.5%（67/68），检测到11例双重感染和2例三重感染；而应用SPF1/GP6+ PCR检测的总阳性率为95.6%（65/68），仅检测到7例双重感染。结论 在SPF1/GP6+ PCR基础上建立了SPF1/GP6++ PCR方法，并证实SPF1/GP6++ PCR具有更高的检测敏感度和更广的HPV型别检测范围