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- 2015
腺病毒介导的DPP6过表达载体的构建及其在大鼠心肌细胞内表达的鉴定
Keywords: DPP6基因, 腺病毒载体, 实时定量PCR, 绿色荧光蛋白, 心肌细胞 Abstract: 摘要 目的:构建腺病毒介导的DPP6过表达载体并验证其在大鼠心肌细胞内的表达.方法:应用PCR技术扩增目的基因DPP6,经酶切、连接等反应将目的基因插入穿梭载体pShuttleCMV中,进而转化至含有AdEasy质粒的大肠杆菌中,进行重组;所产生的腺病毒载体转染在HEK293细胞中,进行腺病毒的包装、分泌和扩增,所得病毒感染大鼠心肌细胞,进行荧光及实时定量PCR(qPCR)鉴定.结果:DPP6过表达腺病毒载体构建成功,经HEK293细胞包装、扩增后,所得病毒可成功感染初生大鼠心肌细胞,观测到腺病毒携带的绿色荧光蛋白表达,qPCR检测DPP6mRNA表达明显升高.结论:成功构建了腺病毒介导的DPP6过表达载体,并在大鼠心肌细胞内成功表达,为进一步研究DPP6在心肌细胞内的功能奠定了基础.
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