腺病毒介导的ＤＰＰ６过表达载体的构建及其在大鼠心肌细胞内表达的鉴定

摘要 目的：构建腺病毒介导的ＤＰＰ６过表达载体并验证其在大鼠心肌细胞内的表达．方法：应用ＰＣＲ技术扩增目的基因ＤＰＰ６，经酶切、连接等反应将目的基因插入穿梭载体ｐＳｈｕｔｔｌｅＣＭＶ中，进而转化至含有ＡｄＥａｓｙ质粒的大肠杆菌中，进行重组；所产生的腺病毒载体转染在ＨＥＫ２９３细胞中，进行腺病毒的包装、分泌和扩增，所得病毒感染大鼠心肌细胞，进行荧光及实时定量ＰＣＲ（ｑＰＣＲ）鉴定．结果：ＤＰＰ６过表达腺病毒载体构建成功，经ＨＥＫ２９３细胞包装、扩增后，所得病毒可成功感染初生大鼠心肌细胞，观测到腺病毒携带的绿色荧光蛋白表达，ｑＰＣＲ检测ＤＰＰ６ｍＲＮＡ表达明显升高．结论：成功构建了腺病毒介导的ＤＰＰ６过表达载体，并在大鼠心肌细胞内成功表达，为进一步研究ＤＰＰ６在心肌细胞内的功能奠定了基础．