ｍｉＲ３４ａ靶向ＭＭＰ１３调控大鼠软骨细胞凋亡的机制

摘要 目的：探讨调控ｍｉＲ３４ａ的表达对大鼠软骨细胞凋亡的影响．方法：大鼠关节软骨原代细胞培养，慢病 毒转染ｍｉＲ３４ａ、ｍｉＲ３４ａｉｎｈｉｂｉｔｏｒ分别使大鼠关节软骨细胞ｍｉＲ３４ａ过表达和抑制表达，另设无关序列对照组，Ａｎ ｎｅｘｉｎＶ／ＰＩ双染流式细胞术分析对比各组大鼠软骨细胞凋亡率，通过生物信息学方法预测ｍｉＲ３４ａ调控软骨细胞凋 亡潜在基因靶点，采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（ｒｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ）检测各组软骨细胞ｍｉＲ３４ａ的表达，检测 软骨凋亡相关因子ＭＭＰ１３、Ｃｏｌ２ａ１的ｍＲＮＡ转录水平；免疫印迹法检测各组的ＭＭＰ１３、Ｃｏｌ２ａ１、ｃａｓｐａｓｅ３的蛋白 表达水平．结果：ｍｉＲ３４ａ过表达后大鼠软骨细胞凋亡增多，抑制ｍｉＲ３４ａ表达后大鼠软骨细胞凋亡减少，同时ｍｉＲ ３４ａ过表达后ｃａｓｐａｓｅ３的表达增高（Ｐ＜００５），ｍｉＲ３４ａ过表达后Ｃｏｌ２ａ１在ｍＲＮＡ和蛋白水平表达下降，而ＭＭＰ １３的表达增加（Ｐ＜００５）．沉默ｍｉＲ３４ａ的表达后Ｃｏｌ２ａ１在ｍＲＮＡ和蛋白水平表达增加，而ＭＭＰ１３的表达下降． ＭＭＰ１３是ｍｉＲ３４ａ调控大鼠软骨细胞凋亡的潜在靶点．结论：ｍｉＲ３４ａ的表达调控大鼠软骨细胞凋亡，ＭＭＰ１３是 ｍｉＲ３４ａ其机制中的潜在靶点．