鱼腥藻PCC 7120 基因alr0267敲除及其功能的初步研究

【目的】 敲除鱼腥藻PCC 7120的alr0267基因，并对其功能进行初步研究。【方法】 克隆获得鱼腥藻PCC 7120 alr0267基因部分片段，通过构建敲除载体，使其与目的基因发生单交换同源重组，从而将鱼腥藻PCC 7120中的alr0267基因敲除，并对敲除体进行纯化和PCR鉴定，然后对alr0267敲除体和野生型固氮异形胞进行形态观察和统计，同时采用实时荧光定量PCR，在培养不同时间（0，3，8，24 h和10 d）检测野生型和alr0267基因敲除体中与异形胞功能相关基因all0813、all2736、alr2887的相对表达量。【结果】 鱼腥藻PCC 7120 alr0267基因被成功敲除；在缺氮条件下培养6～12 d，敲除体异形胞营养细胞数的均值明显少于野生型；实时定量PCR分析表明，野生型中all0813、all2736、alr2887基因表达量均在培养24 h达到最大，敲除体中这3个基因最大相对表达量的出现时间均有所延迟。【结论】alr0267基因敲除导致异形胞分化频率增加，同时影响异形胞的正常发育