梨小食心虫普通气味结合蛋白2（GmolGOBP2）cDNA的克隆与原核表达

【目的】克隆梨小食心虫（Grapholita molesta）普通气味结合蛋白2 （GmolGOBP2）的全长cDNA序列并进行原核表达, 为研究该蛋白在梨小食心虫化学感受系统中的作用奠定基础。【方法】利用RT-PCR和RACE技术克隆GmolGOBP2的全长cDNA序列，并使用原核表达载体pET-32a在大肠杆菌BL21（DE3）中进行表达，用SDS-PAGE和Western blot检测其表达情况。【结果】GmolGOBP2的cDNA全长序列为 637 bp（GenBank登录号：JN857940），开放性阅读框长度为483 bp，编码161个氨基酸残基，成熟蛋白分子质量为15.98 ku，等电点为4.85。GmolGOBP2预测蛋白的N末端具20个氨基酸残基组成的信号肽序列，并且氨基酸序列中具有6个保守半胱氨酸的典型气味结合蛋白家族标志。将GmolGOBP2编码序列重组到表达载体pET-32a中，转入大肠杆菌BL21（DE3）进行原核表达，SDS-PAGE和Western blot检测结果显示，梨小食心虫普通气味结合蛋白基因在大肠杆菌中成功地表达出分子质量约为32 ku的融合蛋白，与预测的融合蛋白分子质量大小一致。【结论】克隆并原核表达了GmolGOBP2 的cDNA序列，可用于研究该蛋白分子结构及其在化学感受系统中的功能