CD20片段抗体在红花悬浮细胞中的表达研究

【目的】研究用红花愈伤组织建立红花悬浮细胞培养体系的条件，并利用红花悬浮细胞通过农杆菌介导转化法表达CD20复合片段抗体。【方法】以红花子叶为外植体，研究不同种类激素组合对愈伤诱导率的影响，筛选优质愈伤组织进行悬浮培养，探索不同初始接种量、蔗糖质量分数、水解酪蛋白质量浓度对红花悬浮细胞生长的影响。将CD20复合片段抗体基因两端引入XmaⅠ/EcoRⅠ酶切位点，并将其与pEASY-T1和pBasta载体相连，构建pEASY-T1-CD20克隆载体和pBasta-CD20表达载体，再将构建的pBasta-CD20表达载体转入根瘤农杆菌，利用根瘤农杆菌介导红花悬浮细胞转化法表达CD20复合片段抗体。【结果】红花子叶愈伤诱导最佳条件为MS+NAA 2 mg/L+6-BA 0.5 mg/L、温度（25±0.1） ℃、光照70 μmol/(m2·s)连续光照，继代培养条件为MS+NAA 1 mg/L+6-BA 0.5 mg/L、30 μmol/(m2·s)连续光照、温度（25±0.1） ℃。悬浮细胞体系培养最佳条件为不加琼脂粉的MS+NAA 1 mg/L+6-BA 0.5 mg/L、接种量2.5 g（50 mL培养基）、蔗糖质量分数2%、水解酪蛋白800 mg/L。pBasta-CD20表达载体构建成功,且目的蛋白在红花悬浮细胞中成功表达。【结论】成功构建了红花悬浮细胞培养体系，并用该体系成功表达了CD20复合片段抗体