hGDF-15基因的克隆及原核表达

【目的】克隆人生长分化因子-15（Human growth differentiation factor-15，hGDF-15）成熟肽基因，构建其原核表达载体，并进行诱导表达，为hGDF-15药理活性和生物学功能研究奠定基础。【方法】利用PCR技术克隆人hGDF-15成熟肽基因，将其连接到pET-28a载体上构建pET-28a-hGDF-15原核表达载体，并将此载体转入Rosetta（DE3）大肠杆菌感受态细胞，获得重组大肠杆菌，对目的蛋白分别采用不同温度（16，25，37 ℃）、IPTG浓度（0.10，0.25，0.50，0.75，1.00 mmol/L）和时间（12，24，36，48 h）进行诱导表达，对表达产物进行SDS-PAGE电泳和Western blot检测，利用Gel Quant Express软件对菌体破碎离心的上清组分和沉淀组分中的蛋白含量进行测定，通过正交试验，分析上清组分和沉淀组分的最适诱导表达条件。【结果】成功获得hGDF-15成熟肽基因，其长度为339 bp；构建了pET-28a-hGDF-15原核表达载体，并诱导表达了hGDF-15蛋白；优化的上清组分最适诱导条件为IPTG浓度0.25 mmol/L、温度16 ℃、时间24 h，沉淀组分最适诱导条件为温度37 ℃、时间36 h、IPTG浓度1.00 mmol/L。【结论】成功克隆了hGDF-15基因，在大肠杆菌中诱导表达出其编码蛋白，并优化出了最适诱导表达条件