降解布洛芬克隆菌株转座子插入突变体的构建

【目的】敲除布洛芬福斯质粒文库克隆菌株4F6中的邻苯二酚-2,3-双加氧酶基因（C23O），构建其Tn5插入突变体，为布洛芬降解调节因子的深入研究奠定基础。【方法】以构建好的3G7 Tn5突变体菌株为基础，借助pKD46质粒的λ-red同源重组酶，将转座子Tn5从菌株3G7中电击转化至4F6，消除pKD46质粒，敲除4F6菌株中的C23O基因，测定出发菌株3G7、4F6及Tn5插入突变体菌株3G7-G9、3G7-H5、4F6-G9和4F6-H5间位苯环的裂解活性。【结果】42 ℃条件下消除了Tn5插入突变体受体菌4F6中的pKD46质粒，构建了4F6-G9和4F6-H5突变体。Tn5转座子插入突变株3G7-G9、3G7-H5、4F6-G9和4F6-H5的间位苯环裂解活性无显著差异；菌株4F6的间位苯环裂解活性虽明显高于菌株3G7，但也仅有1个C23O基因，其活性差异可能与布洛芬降解调控因子有关。【结论】提供了一种简便有效定位并敲除C23O基因的方法