鸡白痢沙门氏菌invA基因的克隆与原核表达

【目的】克隆鸡白痢沙门氏菌侵袭蛋白A（invA）基因并进行原核表达，分析重组蛋白invA的抗原性，为沙门氏菌快速诊断试纸条和新型表位疫苗的研发提供理论依据。【方法】以鸡白痢沙门氏菌野毒株为供试菌，克隆其invA基因，对invA基因编码的蛋白进行生物信息学分析。将invA基因克隆到pET-30a原核表达载体上，构建原核重组表达质粒pET-30a invA，将其转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达，对表达产物进行SDS-PAGE和Western-blot分析，检测其目的蛋白的表达情况和免疫反应特性。【结果】成功获得了1 143 bp的完整的invA基因, 编码381个氨基酸。生物信息学分析结果表明，invA基因编码的蛋白有17个抗原决定簇，其跨膜区域明显，92－105位氨基酸为low complexity典型结构域。构建获得了原核重组表达质粒pET-30a-invA，在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达了约51 ku的invA融合蛋白；Western-blot检测结果显示，该融合蛋白具有良好的免疫反应性。【结论】成功克隆出了1 143 bp大小invA基因，明确了其编码蛋白的生物信息，其诱导表达后获得免疫反应性良好的重组蛋白