根癌农杆菌介导的葡萄风信子遗传转化体系

【目的】以葡萄风信子亚美尼亚 (Muscari armeniacum)的胚性愈伤组织为受体系统，建立高效稳定的葡萄风信子遗传转化体系，为葡萄风信子遗传改良及相关基因功能的研究奠定基础。【方法】通过GUS（β-葡萄糖苷酸酶）瞬时表达率，研究根癌农杆菌的菌液浓度、侵染时间、共培养时间和超声波预处理时间等4个因素对葡萄风信子GUS瞬时表达效率的影响，并在最佳条件下将GUS基因转入葡萄风信子，获得稳定表达转化植株。【结果】葡萄风信子胚性愈伤组织GUS染色结果表明，随着根癌农杆菌菌液浓度的增加及侵染时间、共培养时间和超声波预处理时间的延长，GUS瞬时表达效率均呈现先增后降趋势；当根癌农杆菌菌液OD600为0.5、侵染时间20 min、共培养4 d、80 W功率超声波预处理3 min时，其GUS瞬时表达效率最高，分别为14.43%，13.73%，10.85%和75.36%；在最佳转化体系下将GUS基因转入葡萄风信子，获得207株潮霉素抗性植株。GUS组织化学检测结果表明：在抗性植株的不同部位都呈现不同程度的蓝色，PCR检测有7株为阳性植株，阳性率为7%；反转录PCR检测显示，7株阳性植株中有3株扩增出GUS基因目的条带。【结论】初步建立了根癌农杆菌介导的葡萄风信子遗传转化体系，该体系能显著提高葡萄风信子GUS瞬时表达效率