新疆多浪羊IL-1β基因原核表达载体的构建与表达

【目的】构建新疆多浪羊IL-1β基因编码区的原核表达载体，在大肠杆菌中进行诱导表达，为进一步研究IL-1β蛋白的结构功能奠定基础。【方法】从含质粒pMD-18T-IL-1β的大肠杆菌DH5α中获取IL-1β基因，与pET-28b质粒DNA连接，构建原核表达载体pET-28b-IL-1β。先将其转化到克隆载体E.coli DH5α感受态细胞中大量拷贝，经菌液PCR和EcoRⅠ、XhoⅠ双酶切鉴定后，提取pET-28b-IL-1β质粒转化到表达载体E.coli BL21（DE3）中，再次进行菌液PCR和EcoRⅠ、XhoⅠ双酶切鉴定。将阳性单克隆接种于LB液体培养基，以终浓度为1 mmol/L IPTG进行诱导，用SDS-PAGE电泳检测IL-1β蛋白的表达及存在形式，通过Western blotting验证表达产物是否为目的蛋白。【结果】成功构建了新疆多浪羊IL-1β基因的原核表达载体pET-28b-IL-1β，该载体经诱导后表达出融合蛋白，分子质量为32.4 ku，主要以包涵体的形式表达；经Western blotting检测，带有6×His标签的融合蛋白有很好的反应原性。【结论】成功构建了新疆多浪羊IL-1β基因的原核表达载体pET-28b-IL-1β，其在大肠杆菌BL21（DE3）中经诱导后表达出分子质量约为32.4 ku的IL 1β融合蛋白