产气荚膜梭菌β毒素抗体间接ELISA检测方法的建立

【目的】建立产气荚膜梭菌β毒素抗体间接ELISA检测方法。【方法】将原核表达重组质粒pET-28a-β转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，用IPTG进行诱导表达，表达产物经镍柱亲和层析纯化、尿素梯度透析复性后进行Western blot鉴定。用复性的β毒素重组蛋白作为包被抗原，通过优化间接ELISA试验条件，建立其抗体间接ELISA检测方法，对该方法的特异性、敏感性和重复性进行考察，并用其对521份临床样本进行检测。【结果】通过诱导、纯化和复性，获得了纯度较高且具有良好反应原性的β毒素重组蛋白。间接ELISA条件为：抗原最佳包被质量浓度为5.0 μg/mL，阳/阴性血清最佳稀释度为1∶50，酶标二抗最佳稀释度为1∶2 500，以含50 g/L脱脂奶粉的PBST作为封闭液，37 ℃封闭1 h，抗原抗体作用1 h，TMB显色30 min。间接ELISA的判定标准为OD450≥0.313为阳性，OD450<0.313为阴性；建立的间接ELISA方法的特异性为96%，敏感性为98%；批内变异系数在3%～4%，批间变异系数在9%以下。利用间接ELISA检测方法对521份临床山羊血清样本的检测结果表明，抗体阳性率为72.5%。【结论】对产气荚膜梭菌β毒素进行了原核表达，成功建立了其抗体间接ELISA检测方法，为产气荚膜梭菌β毒素抗体检测试剂盒的研制奠定了基础