禽坦布苏病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立

【目的】 建立禽坦布苏病毒（Avian Tembusu virus，ATmV）TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。【方法】 根据ATmV非结构蛋白NS1的基因特征，设计特异性的引物和探针，建立基于TaqMan探针检测ATmV的实时荧光定量PCR检测方法，对其特异性、重复性进行检测。用建立的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法和之前建立的RT PCR方法同时对临床15份疑似ATmV感染的病料进行检测，计算其符合率。【结果】 成功建立了检测ATmV的实时荧光定量PCR检测方法，当NS1基因含量为（2.67×102）～（2.67×107） 拷贝/μL时有良好的线性扩增，其扩增相关系数为0.998，扩增效率为99.9%。建立的ATmV实时荧光定量PCR检测方法敏感度高，最低检测限为2.67×102拷贝/μL；特异性强，对水禽常见病毒（如Ⅰ型鸭肝炎病毒、新型鸭呼肠孤病毒、禽流感病毒、禽Ⅰ型副粘病毒与番鸭细小病毒等）检测均为阴性；重复性好，组内变异系数和组间变异系数分别为0.39%～1.17%和0.51%～1.82%。对临床送检的15份病料，TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的阳性率为73.33%（11/15），RT-PCR方法的阳性率为60.0%（9/15），2种方法的符合率为100.0%。【结论】 建立了基于TaqMan探针的ATmV实时荧光定量PCR检测方法，该方法可应用于ATmV感染的早期检测