中国南瓜内参基因18S rRNA的克隆及其引物开发

【目的】克隆获得中国南瓜18S rRNA，并设计合适的荧光定量PCR内参，为开展中国南瓜重要功能基因的表达模式和调控机制研究奠定基础。【方法】以中国南瓜‘密本’品种的基因组DNA为模板，通过PCR方法克隆中国南瓜18S rRNA基因序列，再利用Primer Premier软件设计荧光定量PCR引物，对该内参基因在中国南瓜不同组织、生长阶段及非生物胁迫条件下的表达稳定性进行检测。【结果】首次克隆得到中国南瓜18S rRNA基因序列，其长度为1 857 bp，GenBank登录号为KM979454，该基因与西瓜、西葫芦等瓜类蔬菜18S rRNA基因同源性大都在90%以上；以中国南瓜内参基因18S rRNA核苷酸全长序列为基础设计1对荧光定量PCR引物，以中国南瓜果肉总RNA逆转录的cDNA第一链为模板进行PCR扩增，该引物扩增的片段大小为132 bp，扩增效率高，特异性强；18S rRNA基因在中国南瓜不同组织、生长发育阶段及非生物胁迫条件下均能稳定表达。【结论】克隆获得中国南瓜18S rRNA基因，该基因适合在中国南瓜基因表达研究中作为内参基因