奶牛乳样和粪样中幽门螺杆菌PCR检测方法的建立及初步应用

【目的】建立一种特异、灵敏的牛源幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，Hp)检测方法，为家畜感染幽门螺杆菌的流行病学调查鉴定提供支持。【方法】分别选取Hp的16S rRNA、UreA、glmM为靶基因设计特异性引物，以H.pylori动物模型适应菌株SS1株为标准菌株建立PCR检测方法，并进行PCR条件优化，运用所建立的最优PCR方法检测临床奶牛乳样和粪样中Hp的分布情况。【结果】PCR特异性试验结果显示，仅Hp SS1株能扩增出特异性条带，而对照菌株金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌、大肠杆菌及蜡样芽孢杆菌均无扩增条带。PCR灵敏度试验结果显示，16S rRNA、UreA、glmM基因在乳样中的最低检出浓度分别为101，103和103 CFU/mL，在粪样中的最低检出浓度分别为101，104和104 CFU/mL。应用该PCR方法对采集自规模化养殖场及散养的共计41头奶牛的乳样和粪样进行检测，成功检出Hp DNA，靶基因16S rRNA、UreA和glmM序列与NCBI上所发表的J166和ATCC43504菌株序列的同源性均达98%以上。【结论】成功建立了特异、灵敏的牛源Hp的PCR检测方法，可以应用于临床奶牛乳样和粪样中Hp的检测