斜卧青霉转录调控蛋白Hac1染色质免疫共沉淀分析方法的建立

【目的】对斜卧青霉转录调控因子Hac1进行染色质免疫共沉淀(CHIP)试验，为其调控机制及生物学功能研究奠定基础。【方法】以斜卧青霉为材料，DTT诱导转录调控因子Hac1表达，用交联Buffer处理菌丝，使Hac1与靶基因交联，超声破碎染色质后，进行解交联染色体检验，研究不同交联时间（5,10,20,30,40 min）、不同菌丝用量（10 mL CHIP缓冲液中分别添加0.25,0.50,1.00,1.50 g菌丝）及不同超声功率（15,20,25,30 W）、超声时间（1,3,5 s）、超声间隔时间（10,20,30,40 s）、超声次数（15,25,30,40次）对试验效果的影响。在优化的条件下对菌丝进行处理，获得合格的DNA片段，进行CHIP试验，采用随机PCR方法检测染色质免疫共沉淀效果。【结果】适用于斜卧青霉Hac1的最佳染色质免疫共沉淀试验的条件为：交联时间控制在20 min以内；最佳菌丝用量为10 mL CHIP缓冲液中加入1 g菌丝；25 W超声功率，工作时间5 s，间隔时间40 s，超声30次。在优化的条件下富集DNA片段,进行随机PCR,结果在500~750 bp间可见明显的扩增条带。【结论】优化了斜卧青霉转录调控因子Hac1 CHIP条件，成功进行了CHIP试验