范式酵母Wss1金属蛋白酶的原核表达与理化性质

【目的】建立范式酵母（Vanderwaltozyma polyspora）Wss1（VpWss1）金属蛋白酶的原核表达纯化系统，对该蛋白酶的均一性和自切活性进行初步分析，为VpWss1的晶体制备及结构解析奠定基础。【方法】构建VpWss1基因的融合表达载体，将其转化入E.coli 2566菌株中进行诱导表达，利用Ni-NTA亲和柱和SP阳离子交换柱对融合蛋白进行纯化。通过动态激光散射仪（DLS）和Superdex 200分子筛对该蛋白酶的均一性和聚集状态进行分析，同时与不同类型和长度的DNA底物孵育，分析野生型和突变型SUMO VpWss1蛋白的自切活性。【结果】表达纯化的目的蛋白SUMO VpWss1/SUMO VpWss1E96Q为可溶性蛋白，分子质量约为50 ku，纯度>95%。野生型SUMO-VpWss1蛋白均一性较差，呈现多种状态，但突变型SUMO VpWss1E96Q蛋白的均一性较好，其主要单一状态（Mass）的含量达到93.2%。在不同类型和长度DNA下，野生型SUMO-VpWss1均可发生自切，且随DNA长度的延长呈现出先增强后减弱的趋势，而突变型SUMO VpWss1E96Q的自切活性显著减弱。【结论】成功表达纯化了金属蛋白酶SUMO VpWss1及其突变体SUMO VpWss1E96Q，明晰了两者的均一性和自切活性。