牛RECQL解旋酶的原核表达纯化及解旋条件优化

【目的】 通过大肠杆菌表达纯化牛（Bos taurus）RECQL蛋白，利用停流光谱技术对解旋条件进行优化，为研究RECQL的酶促反应动力过程奠定基础。【方法】 将人工合成的牛RECQL蛋白编码序列与pET21a载体相连接，获得重组表达载体pET21a BtRecql后，将其导入大肠杆菌BL21（DE3）菌株中进行诱导表达，经过Ni NTA亲和层析和Superdex 200凝胶过滤层析,得到纯化的重组蛋白BtRECQL；再利用停流光谱技术对BtRECQL解旋过程进行检测分析，通过摸索不同的试验参数找到BtRECQL发挥解旋功能较适宜的条件。【结果】 得到了纯度大于95%的BtRECQL蛋白，产量为0.29 mg/L。在BtRECQL浓度为60 nmol/L，反应条件为1.0 mmol/L ATP，30 mmol/L Tris-HCl，pH 7.5，60 mmol/L NaCl，1 mmol/L MgCl2，2 mmol/L DTT，孵育温度为37 ℃时，该蛋白解旋活性较好。【结论】 成功表达并纯化了BtRECQL蛋白，确定了其最优的解旋条件。