一株鹅源呼肠孤病毒的分离鉴定及致病性研究

【目的】从疑似感染鹅呼肠孤病毒的病料中分离鉴定一株鹅源呼肠孤病毒JS-01，并对病毒分离株的致病性进行初步研究，为开展该病毒的进一步研究奠定基础。【方法】取病死鹅的肝、脾组织冻融3次后充分匀浆，8 000 r/min离心15 min取上清，接种10日龄鹅胚的卵黄囊，收集24~144 h死亡的鹅胚尿囊液，并提取病毒RNA。根据鹅呼肠孤病毒基因的保守序列设计特异性引物，利用该引物对所提取的病毒RNA进行RT-PCR，回收后与pMD18-T载体连接，将重组载体转化到DH5α大肠杆菌并在AMP＋/LB培养基中培养，对阳性菌落测序，对测得的序列进行核苷酸及氨基酸同源性比对，并绘制系统遗传进化树。【结果】分离病毒JS-01的RT-PCR显示，其基因序列长度380 bp，为鹅呼肠孤病毒σC基因片段；系统遗传进化分析表明，分离株JS-01与水禽源呼肠孤病毒处于同一分支，同源性为94.8%～96.5%，而与鸡呼肠孤病毒的同源性仅为40.6%～52.2%；在雏鹅上进行的动物回归试验表明，病毒JS-01可使雏鹅肝、脾、肾等器官发生病变。【结论】分离毒株为鹅呼肠孤病毒，该分离株对雏鹅有一定致病性，应注意本病的防控。