流感病毒在MDCK细胞上培养条件的优化分析
Optimization and analysis of culture condition for cultivation of influenza virus on MDCK cell

摘要：目的　优化甲、乙型流感病毒在MDCK细胞上的培养条件，提高流感病毒的分离效果。方法　将5种流感病毒液（甲型流感病毒：甲型H1N1、季节性H1N1、季节性H3N2和乙型流感病毒：Victoria、Yamagata）分别接种于MDCK细胞，通过比较不同的病毒接种量（30 μl/cm2、60 μl/cm2、90 μl/cm2、120 μl/cm2、150 μl/cm2）、不同的病毒孵育时间（0.5 h、1.0 h、1.5 h、2.0 h、2.5 h、3.0 h）、不同的TPCK-胰酶添加浓度（1.0 μg/ml、2.0 μg/ml、3.0 μg/ml、4.0 μg/ml、5/0 μg/ml）以及不同的MDCK细胞增毒代次（连续盲传5代）对5种流感病毒易感性的影响，确定其最佳分离效果；对分离后的病毒以红细胞凝集（HA）方法检测病毒滴度，结果　通过对比病毒HA滴度结果，5种流感病毒（甲型H1N1、季节性H1N1、季节性H3N2、Victoria和Yamagata）的最佳病毒接种量分别为：90 μl/cm2、90 μl/cm2、60 μl/cm2、120 μl/cm2、120 μl/cm2；最佳病毒孵育时间：甲型流感病毒为1.0～1.5 h，乙型流感病毒为2.0～2.5 h；胰酶最佳使用浓度分别是：2.0 μg/ml、2.0 μg/ml、2.0 μg/ml、3.0 μg/ml、3.0 μg/ml；最适宜的细胞增毒传代次数为：1代、3代、2代、2代、2代；甲型流感病毒经培养后病毒的HA滴度低于乙型流感，甲型H1N1流感病毒经培养后HA滴度较低。结论　甲型流感病毒对MDCK细胞的易感性低于乙型流感病毒；甲型H1N1流感病毒的分离效果低于季节性H1N1和季节性H3N2；Victoria与Yamagata的分离条件基本相同。