幽门螺杆菌塑性区hp4565基因的克隆表达 及其功能初探
The cloning and expressing of hp4565 gene and the preliminary study on its biological function in Helicobacter Pylori's plasticity zone

摘要：目的　为克隆表达幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，H.pylori）临床株的塑性区hp4565基因，并制备抗体，以探讨其生物学功能。方法　以标准株NCTC shfi470的hp4565基因组全长设计引物，以H.pylori临床株为模板，PCR扩增临床株中hp4565基因，经原核表达后，选定最适条件大量诱导表达并经Ni2+-NTA柱纯化的目的蛋白。用MTT法检测重组蛋白对胃上皮细胞GES-1增殖影响，定磷法检测重组蛋白ATP酶活力。用纯化蛋白为抗原免疫家兔后制备多克隆抗体，ELISA检测抗体效价。结果　成功克隆表达了hp4565基因，全长942 bp，编码313个氨基酸，原核表达后SDS-PAGE电泳显示有41 kDa的融合蛋白，Western blot鉴定是预期HP4565蛋白。纯化后获得较高纯度的重组蛋白，MTT法结果显示HP4565蛋白在低浓度（≤40 mg/L）时对细胞增殖无明显影响；蛋白浓度在60 mg/L以上时，细胞增殖随着培养时间的延长和浓度的增加呈现逐渐降低的趋势；重组蛋白具有一定的ATP酶活力，免疫家兔制备的多克隆抗体效价为1∶1.6×105。结论　成功克隆表达了H.pylori临床株塑性区hp4565基因，得到纯度较高的蛋白和滴度较高的抗体，重组蛋白对胃上皮细胞增殖有一定影响，并具有一定的ATP酶活力。