肠道病毒CODEHOP巢式 RT - PCR检测及基因分型方法的建立
Development of a CODEHOP nest RT-PCR method for the detection and genotyping of enterovirus

目的 建立一种可用于肠道病毒的快速检测和基因分型的一致简并引物巢式RT - PCR方法。方法 根据genbank发表的不同肠道属病毒多聚蛋白氨基酸序列，用CODEHOP在线软件设计1对肠病毒属简并引物，并在该引物的扩增区域内用Primer 3.0软件设计了EV71、COXA16和COXA10 3个病毒的特异引物，建立了巢式RT - PCR方法，对其检测灵敏度、特异性进行了分析，并对27份手足口病患者粪便样品进行了检测。结果 该方法第1轮简并引物扩增的灵敏度是17 ng；第2步分型引物扩增的灵敏度是第1步反应的100倍。27份手足口病患者粪便样品RT - PCR检测结果为阳性，其中15份样品经检测为EV71病毒阳性，10份样品经COXA16病毒阳性，2份样品经检测为COXA10病毒阳性。结论 建立的一致简并引物巢式RT - PCR检测方法具有特异强、灵敏高的优势，可用于肠道病毒的检测和基因分型。