斑点热群立克次体实时荧光定量PCR检测方法的 建立及应用
Establishment and application of real-time fluorescence quantitative PCR in spotted fever group rickettsiae detection

摘要：目的　探讨实时荧光定量PCR快速检测斑点热群立克次体标本的应用价值。方法　根据斑点热群立克次体外膜蛋白A（OmpA）基因保守序列设计TaqMan特异性探针和引物，进行实时荧光定量PCR方法学评估，并同时运用该法和普通PCR法对对海南省2012年不明原因发热病人157份血标本进行斑点热群立克次体的检测及结果分析。结果　本研究建立的定量标准曲线循环阈值（Ct值）和模板拷贝数呈良好的线性关系（R2值为0.998）。该法能检出斑点热群立克次体阳性标准品―西伯利亚立克次体（R.sibirica）最小浓度为102 copies/μl，灵敏度比普通PCR高100倍。用该法检测斑点热群立克次体DNA，结果为阳性，检测金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、致泻性大肠埃希菌和副溶血弧菌等其他病原细菌DNA结果均为阴性。采用实时荧光定量PCR法对实验室库存的发热病人血标本DNA进行回顾性检测，结果示阳性2例，检出率为1.2%（2/157），而普通PCR检测结果均为阴性。结论　实时荧光定量PCR法具有快速、特异和灵敏的优点，在处理突发公共卫生事件中可发挥快速检测的优势，在斑点热诊断中具有重要的临床意义。