BBI阻断LPS对肠道上皮细胞间紧密连接蛋白的抑制作用

目的探讨大豆来源的蛋白酶抑制剂（BBI）是否能阻断脂多糖（LPS）对肠道上皮细胞间紧密连接蛋白的下调作用及其机制。方法用CCK8试剂盒检测LPS和BBI对HT29细胞的毒性作用。用BBI预处理HT29细胞6 h，再用LPS刺激，分别用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法（Western Blot）检测细胞紧密连接蛋白（ZO1, Occludin）、TLR4及MyDD8的表达；通过Western Blot检测NFκB的激活。结果LPS 1 000 ng/mL和BBI 1 000 μg/mL对HT29细胞均无毒性作用。LPS可显著地上调HT29细胞TLR4表达，且上调作用具有时间与剂量效应；能明显下调紧密连接蛋白的表达，其下调作用与LPS浓度成正比；能明显激活NFκB，且具有剂量效应；LPS对HT29细胞的这种作用可被BBI显著地抑制。结论通过抑制LPS诱导的肠道上皮细胞TLR4的表达和NFκB的活化，BBI能显著地阻断LPS对肠道上皮细胞间紧密连接蛋白的抑制作用