近交系五指山小型猪骨髓间充质干细胞分离培养及生物特性
Separation culture and biological characteristics analysis for bone marrow-derived mesenchymal stem cells from inbreed line miniature pig of Wuzhishan

目的：建立近交系五指山小型猪(inbreed line miniature pig of Wuzhishan，ILMW)骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells，BM-MSCs)体外分离培养和鉴定方法，比较我国不同种系猪来源BM-MSCs的生物 学特性，为下一步研究BM-MSC对ILMW单侧输尿管梗阻所致肾损伤的修复机制提供细胞来源。方法：选取4月龄及 10月龄健康ILMW各4头，从距髂骨翼边缘1 cm处穿刺，抽出骨髓约5 mL；经密度梯度法分离单个核细胞，分别用含 10%，12%和15%胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)的完全培养基于体外培养；并取第1代、第3代、第5代、第11代细胞 分别行细胞形态学、表型、分化能力、生长曲线、细胞周期等检测。结果：分离培养的BM-MSCs在体外贴壁，呈成 纤维样或旋涡状生长；原代细胞18 h出现贴壁，第6天进入对数增长期，约9 d后80%融合，传代后细胞状态未出现明显 异常。细胞表面抗原检测显示CD29，CD44，CD90表达呈阳性；CD34和CD45表达呈阴性；且各代间差异无统计学意 义(均P>0.05)。成骨诱导18 d后，茜素红染色阳性；成软骨诱导21 d后，阿利新蓝染色阳性。细胞周期检测显示G0/G1 的细胞百分比约为81.45%。结论：ILMW的BM-MSCs贴壁时间早，细胞增殖活跃，传代周期短，传代后仍能保持稳定 的生物学特性，是中国大陆地区猪来源BM-MSC的最佳选择之一