硫氧还蛋白-2 在氧化损伤的人晶状体上皮细胞中的表达及其意义
Expression of thioredoxin-2 in human lens epithelial cells with oxidative damage and its significance

目的：探讨硫氧还蛋白-2(thioredoin-2，Trx-2)是否参与白内障的发病过程及其对过氧化氢(H2O2)诱导的 人晶状体上皮细胞氧化损伤的影响。方法：选取志愿者(因外伤行透明晶状体取出术患者)10例和行超声乳化白内 障手术患者(年龄大于60岁)30例的晶状体前囊膜，采用链霉素亲生物素蛋白-过氧化物酶标免疫组织化学法检测志 愿者和白内障患者晶状体上皮细胞中Trx-2蛋白的表达情况。体外培养SRA01/04细胞，根据不同处理分为空白对照 组、20 μmol/L H2O2组、50 μmol/L H2O2组、100 μmol/L H2O2组、阴性对照组(转染对照空pCMV6质粒并用100 μmol/L H2O2处理)和过表达Trx-2组(转染pCMV6-Trx-2过表达质粒并用100 μmol/L H2O2处理)。采用噻唑蓝[3-(4,5-dimethyl-2- thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide，MTT]法检测各组细胞活力；采用流式细胞术检测各组细胞的凋亡；采用 化学比色法检测各组细胞中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)和过氧化氢酶(catalase，CAT)活性，谷胱甘肽 (glutathione，GSH)和丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量；采用Western印迹检测各组细胞中Trx-2以及B细胞淋巴瘤/白 血病-2蛋白(B-cell lymphoma 2 protein，Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein，Bax)和含半胱氨酸的天冬氨酸 蛋白水解酶-3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3，caspase-3)的表达。结果：与志愿者相比，白内障患者晶状体上皮 细胞中Trx-2蛋白表达明显减少(P<0.05)。与空白对照组比较，20， 50，100 μmol/L H2O2组Trx-2蛋白表达量均明显降低 (均P<0.05)。与空白对照组相比，100 μmol/L H2O2组和阴性对照组细胞存活率降低、凋亡率增加，细胞内SOD和CAT 活性降低、GSH含量减少、MDA含量增加，Trx-2和Bcl-2蛋白表达降低，Bax和caspase-3蛋白表达增加(均P<0.05)。与 阴性对照组比较，过表达Trx-2组细胞存活率增加、凋亡率降低，SOD和CAT活性增加、GSH含量升高、MDA含量降 低，Trx-2和Bcl-2蛋白表达增加，Bax和caspase-3蛋白表达减少(均P<0.05)。结论：Trx-2参与白内障发病中上皮细胞的凋 亡，过表达Trx-2能够减少H2O2诱导的细胞凋亡，这可能与拮抗H2O2诱导的氧化损伤有关