梁氏异蝎毒素促进KYSE-510细胞凋亡的作用机制研究
Mechanism of the Enhancement of Scorpion Venom from Heterometrus liangi on Apoptosis and Necrosis of KYSE-510 Cell

中文摘要：为了研究蝎毒抑制肿瘤细胞生长的机理，提取梁氏异蝎 Heterometrus liangi蝎毒干预人食管癌细胞（KYSE-510细胞），运用流式细胞术、电镜技术、逆转录PCR和Western blot方法分别检测蝎毒对KYSE-510细胞凋亡的影响以及对caspase-3基因表达。结果表明：经蝎毒处理的实验组KYSE-510活细胞数量显著减少，其原因是蝎毒引起细胞大量凋亡和坏死。经不同浓度（50 μg·mL -1，100 μg·mL -1，200 μg·mL -1）蝎毒处理的KYSE-510细胞与对照组的caspase-3基因在mRNA水平表达相近，而在蛋白表达水平上，实验组细胞与对照组细胞相比，蝎毒促进了caspase-3的剪切活化，且以200 μg·mL -1蝎毒处理的KYSE-510细胞caspase-3的剪切活化最强，由此证明蝎毒导致KYSE-510细胞凋亡的机理之一可能是其促进了caspase-3的剪切活化。
英文摘要：Scorpion venom was extracted from Heterometrus liangi to study the mechanism of inhibition of venom on tumor grow. The effect of scorpion venom on apoptosis and necrosis of KYSE-510 cell and expression levels of caspase-3 were investigated by electron microscopy, Annexin V-FITC, and propidiumiodide double staining analysis by flowcytometry as well as reverse transcription PCR and Western blot. The results indicated that the mRNA expression levels of caspase-3 in KYSE-510 cells that treated with different concentrations of scorpion venom (50 μg·mL -1, 100 μg·mL -1, 200 μg·mL -1) were similar to these of control. However, the expressions of caspase-3 in KYSE-510 cells were obviously up-regulated by scorpion venom as determined by Western blot, especially when the cells were treated with 200 μg·mL -1 scorpion venom. These results suggested that the possible mechanism of the scorpion venom was accelerated protein splicing activity of caspase-3. 2016,35(5): 660-665 收稿日期：2016-06-03 DOI：10.11984/j.issn.1000-7083.20160152 分类号：Q78 基金项目：湖南省科技厅重点项目（2014FJ2003） 作者简介：王娟(1990-),女,硕士研究生,研究方向为发育生态学,E-mail:240647109@qq.com;李秦晋(1975-),男,博士研究生,讲师,主要从事农业生态学研究,E-mail:18157099@qq.com *通讯作者：王智,博士,教授,博士研究生导师,主要从事生态学和害虫生态调控研究,E-mail:wangzspider@sina.com.cn 参考文献： 董伟华, 孔天翰, 韩雪飞, 等. 1999. 蝎毒抗癌多肽对4种人肿瘤细胞系的作用[J]. 河南医科大学学报, 34(1): 52-55. 付士波. 2005. 蝎毒体外抗肿瘤作用的实验研究及机制探讨[D]. 吉林: 吉林大学. 贾莉, 孙宏丹, 孟秀香, 等. 2001. 蝎毒对白血病Raji细胞株的生长抑制和诱导凋亡作用的研究[J]. 白血病淋巴瘤, 10(4): 205-207. 孔天翰, 林山, 韩雪飞, 等. 2004. 蝎毒多肽对肿瘤细胞的抑制作用研究[J]. 中国病理生理杂志, 20(6): 968-972. 李桂生, 杨春旭, 韦晓谋, 等. 2004. 蝎毒对人肝癌Bel-7404细胞端粒酶活性的影响[J]. 东南大学学报(医学版), 23(3): 166-169. 孙立东, 侯长安, 邓春禧, 等. 1996. 蝎素抗癌因子介入性治疗晚期肝癌疗效观察[J]. 郑州大学学报(医学版), (3): 36-38. 王兆朋, 张维东, 张捷, 等. 2006a. 蝎毒多肽提取物对前列腺癌细胞增殖的影响[J]. 实用癌症杂志, 21(1): 1-3, 10. 王兆朋, 张维东, 张捷, 等. 2006b. 蝎毒多肽提取物对非激素依赖性前列腺癌细胞增殖抑制作用的实验研究[J]. 中国药理学通报, 22(8): 938-942. 许世伟, 丰雪琴, 孙学国. 2014. 参附注射液对心肌缺血再灌注损伤患者Bcl-2、Bax与Caspase-3蛋白水平的影响[J]. 中医学报, 29(2): 267-268. 杨春旭, 戴盛明, 朱灵. 2002. 东亚钳蝎毒生物提取物对人肝癌细胞体外增殖及凋亡的影响[J]. 肿瘤防治研究, 29(3): 184-186. 杨春旭, 韦晓谋, 朱灵. 2005. 蝎毒与丝裂霉素联合应用对人肝癌细胞生长的影响[J]