JQ1通过抑制Akt/mTOR通路协同阿霉素抑制人骨肉瘤细胞的实验研究

目的 探索BRD4抑制剂JQ1协同传统化疗药物阿霉素（adriamycin, ADM）治疗骨肉瘤的有效性。方法 选取人骨肉瘤细胞系143b，在体外进行CCK8细胞增殖实验，了解ADM和JQ1对143b细胞的半数抑制率（IC50）剂量；应用低于IC50剂量的ADM或JQ1或联合应用ADM和JQ1，进行平板克隆实验和细胞凋亡实验；利用裸鼠皮下成瘤实验，观察应用ADM或JQ1或联合应用ADM和JQ1对体内肿瘤生长的抑制，以及诱导体内肿瘤细胞凋亡的作用；通过Western印迹法探索JQ1协同ADM抑制骨肉瘤细胞的可能机制。结果 ADM和JQ1对人骨肉瘤细胞系143b的IC50分别为0.23μmol/L和9.47μmol/L；选取0.2μmol/L ADM和8μmol/L JQ1进行平板克隆和细胞凋亡实验。单独应用ADM或JQ1可以抑制骨肉瘤细胞的克隆形成能力并诱导凋亡，联合ADM和JQ1可显著抑制骨肉瘤细胞的克隆形成能力并诱导凋亡，效果显著优于单药（P<0.05）。单独应用ADM或JQ1可抑制小鼠体内骨肉瘤的生长，联合应用ADM和JQ1对肿瘤生长的抑制要明显优于单独用药，差异具有统计学意义（P<0.05）。Caspase3免疫组化染色提示单独应用ADM或JQ1都可以在体内诱导人骨肉瘤细胞143b的凋亡，联合ADM和JQ1显著增强了对骨肉瘤细胞凋亡的诱导。Western印迹法提示骨肉瘤细胞在单独应用ADM后，磷酸化的Akt（p-Akt）和磷酸化的mTOR（p-mTOR）蛋白表达都上调了，而JQ1能够抑制p-Akt和p-mTOR的表达，JQ1联合ADM处理过的骨肉瘤细胞中p-Akt和p-mTOR的表达显著低于单独应用ADM组。结论 JQ1联合ADM能够显著抑制骨肉瘤细胞在体外和体内的生长，并诱导骨肉瘤细胞的凋亡；JQ1可能是通过抑制Akt/mTOR通路协同ADM发挥抑制人骨肉瘤细胞的作用。
Objective To explore the effects of BRD4 inhibitor JQ1 with adriamycin(ADM) on human osteosarcoma cells. Methods The proliferation of human osteosarcoma 143b cells was measured by CCK8 method and IC50 of ADM and/or JQ1 was determined. The cultured 143b cells were treated with ADM and JQ1 alone or in combination in a dos