羰基还原酶突变体高选择性催化不对称还原大位阻羰基化合物

摘要 以立体选择性羰基还原酶（RCR）的双突变酶RCR-F285A/W286A为对象，考察了该突变酶对酮酯类和杂环酮类底物的催化性能（包括酶活力和动力学参数）及对映体选择性，发现其对2-氧代-4-苯基丁酸乙酯（OPBE）、苯甲酰基乙酸乙酯（EBA）和1-苄基-3-吡咯烷酮均具有酶活性，并且以高光学纯度生成相应手性醇（e.e.>99%）.考察了反应条件对产率最高的OPBE的不对称转化反应的影响，结果表明，当pH=7.0，反应温度30℃，3.5%（体积分数）的异丙醇作助溶剂，加入1 g/L底物时，产率达到80.3%.进一步通过分批补料减弱底物抑制作用，在10 g/L的底物浓度下，时空产率为0.062 g·L-1·h-1，为酶法不对称合成（R）-2-羟基-4-苯基丁酸乙酯[（R）-HPBE]的工业应用提供了实验基础