羰基还原酶CR2重组酶体系不对称合成(S)-N,N-二甲基-3-羟基-3-(2-噻吩)-1-丙胺

摘要 构建了羰基还原酶CR2重组酶体系，并优化了相关的酶促催化反应条件.通过在催化体系中添加辅酶NADP+（0.1 mmol/L）和辅底物葡萄糖（120 g/L），在30℃及pH=8.0的条件下反应4 h，CR2重组酶体系不对称还原N，N-二甲基-3-酮-3-（2-噻吩）-1-丙胺（DKTP，10 g/L），合成了高光学纯度（S）-N，N-二甲基-3-羟基-3-（2-噻吩）-1-丙胺[（S）-DHTP，e.e.值>99.9%]，产率为62%.在酶促催化过程中，由于辅酶循环生成葡萄糖酸导致反应体系pH值下降而影响催化效率.通过调控反应体系pH值，（S）-DHTP的产率提高到68%.不同浓度底物的反应过程表明底物对CR2酶促反应具有抑制作用，且在10 g/L底物浓度下反应的时空产率可达1.3 g·L-1·h-1