东亚钳蝎Na+通道毒素BmkNaTx12的基因克隆与重组表达

利用野生东亚钳蝎毒腺构建cDNA文库，并通过序列比对确定了一条全新的Na+通道长链毒素BmkNaTx12并克隆出其全长cDNA序列。序列比对显示BmkNaTx12的序列与墨西哥毒蝎的β-毒素Cn12具有较高的结构相似性，通过同源模型构建并选取打分最高的模型得到BmkNaTx12的预测结构，经分子动力学优化发现蛋白结构在300 ns趋于稳定，而蛋白20、35、52个氨基酸处的波动很可能由于这些氨基酸所处位置在loop区域导致。进一步构建了BmkNaTx12-Fc融合蛋白重组表达系统，通过Western blot技术确定重组蛋白最佳表达时间，并在HEK293细胞中成功表达出BmkNaTx12-Fc融合蛋白。经蛋白A亲和色谱纯化后获得的重组融合蛋白经SDS-PAGE凝胶电泳及高效液相鉴定后纯度高达95%。此外，全细胞膜片钳实验结果显示:BmkNaTx12-Fc在1 μmol/L浓度下能增大20% Nav1.7峰电流。研究结果为后续的生物学功能研究奠定了理论基础