不同渗透压条件下金钱鱼肾原代细胞的差异蛋白分析

为了研究海水鱼类肾脏的渗透压调节功能，以金钱鱼肾原代细胞作为研究对象，使用低渗、等渗和高渗培养基处理细胞24 h，通过Label-free定量法进行蛋白质组学分析，质谱定性得到蛋白质共计3 787个，低渗组与等渗组比较，得到显著差异蛋白14个；高渗组与等渗组比较，得到显著差异蛋白31个。筛选标准为Ratio >+/-2，且P < 0.05。对差异表达蛋白进行Gene Ontology（GO）功能注释，GO富集分析以及蛋白质聚类分析，并挑选了与细胞骨架、能量合成以及蛋白结合相关的蛋白质进行了mRNA水平的定量检测，从基因和蛋白水平了解肾脏细胞在渗透调节中的变化。结果显示：低渗组中，细胞骨架相关蛋白质受到的影响较大，其中包括微管蛋白α-4A链、微管蛋白β链、肌球蛋白-11以及typeⅠ cytoskeletal 18-like，而高渗组中差异显著的蛋白质多为细胞外间质蛋白，如纤连蛋白、胶原蛋白等。因此推测低渗刺激后，胞内渗透压高于胞外渗透压，细胞立即膨胀并大量表达细胞骨架蛋白应对低渗刺激，适应细胞形态的改变；而高渗刺激下，细胞处于失水状态，形态骤缩，影响细胞间的粘连，而fn、plod2和arf1升高表明，细胞正在修复受损蛋白。本研究从细胞水平初步分析了金钱鱼肾脏在不同渗透压刺激下的应答机制，为研究细胞水平的渗透压调节机制提供了新的观点