白及原生质体的分离与纯化
A Protocol for the Isolation and Purification of Protoplast from Bletilla striata Leaves

为建立起白及原生质体分离纯化的技术体系，以白及组培苗叶片为材料，经不同方式预处理后，用不同浓度的纤维素酶、果胶酶、离析酶和甘露醇组合进行酶解，将释放出来的原生质体用过滤和离心的方法进行纯化，最后用荧光素双醋酸酯（FDA）法对纯化的原生质体进行活力率测定，以期系统建立起酶解法从叶片中分离纯化出白及原生质体的技术流程。结果发现在低温黑暗+0.75 mol·L-1甘露醇条件下对叶片进行预处理、酶液组合为1.5%纤维素酶Cellulase R-10+0.4%果胶酶Pectolyase Y-23+0.5%离析酶Macerozyme R-10+0.75 mol·L-1甘露醇、酶解液pH值保持在5.8、摇床转速120 r·min-1、酶解4 h时，得到的原生质体产量最大，达4.72×106个·g-1，活力率也达90.4%。本研究构建了用白及叶片分离和纯化原生质体的技术流程，为白及遗传资源的拓展和遗传改良奠定了一定的物质和技术基础。