迭代饱和突变提高卤醇脱卤酶HheAAM催化制备6-氰基-3,5-二羟基己酸叔丁酯的酶活 Enhancement of HheAAM Activity via Iterative Saturation Mutagenesis for tert-Butyl 6-Cyano-3, 5-Dihydroxyhexanoate Synthesis

（3R，5R）-6-氰基-3，5-二羟基己酸叔丁酯（A7）是合成降血脂药物阿托伐他汀钙的关键手性中间体，利用卤醇脱卤酶催化（3R，5S）-6-氯-3，5-二羟基己酸叔丁酯（D3）的脱卤氰化反应制备A7是很有潜力的合成方法。现有研究存在的主要问题是卤醇脱卤酶种类少，对底物D3的催化活性很低，且鲜见有关脱卤酶分子改造提高其对D3催化活性的报道。本研究利用基因挖掘技术获得了一个对D3表现出较高催化活力的卤醇脱卤酶HheAAM（来源于Agromyces mediolanus sp.），运用定向进化和半理性设计方法确定了4个影响酶活的关键位点（84、88、136、144位），然后使用迭代饱和突变（ISM）策略对这4个位点进行组合突变，突变株M4-HheAAM（84S-88L-136T-144C）的比酶活为0.89 U·mg-1，是野生型HheAAM（Wt-HheAAM）的13倍，对D3的催化活性得到了显著的提高。