环鸟苷酸兔单克隆抗体的制备和竞争酶联免疫吸附测定方法的建立

目的:研制环鸟苷酸(cGMP)兔单克隆抗体,并建立测定cGMP浓度的竞争ELISA方法.方法:用人工合成的环鸟苷酸—钥孔血蓝蛋白(cGMP-KLH)免疫新西兰大白兔,采用Epitomics公司的兔单克隆抗体技术制备针对cGMP的兔单克隆抗体;应用cGMP兔单克隆抗体建立竞争ELISA方法,并对该方法的特异性、精密度和回收率进行测定.结果:所制备的cGMP兔单克隆抗体的效价为3.1 ng/mL,50%抑制浓度(IC50)为12.57 ng/mL.与环磷酸肌苷的交叉反应率为33.1%,与其他结构类似的化合物无交叉反应.所建立的cGMP竞争ELISA方法的检测范围为0~120 ng/mL,最低检测限为1.95 ng/mL,回收率为89%~103%,批次内和批次间的精密度分别小于11.68%和13.85%.结论:成功制备高效价、高特异性的cGMP兔单克隆抗体,并建立了测定cGMP浓度的竞争ELISA方法.