基于可变数目串联重复序列的痰液结核分枝杆菌检测方法建立及初步应用

目的:结核分枝杆菌散在分布重复单位及可变数目串联重复序列(MIRU-VNTR)是一项应用于结核分枝杆菌分子分型的技术,本研究基于该技术旨在建立一种直接应用临床痰液标本检测结核分枝杆菌的实验室方法。方法:根据扩增条件及临床检测的实际需要,优化选择八个MIRU-VNTR位点(MTUB21、MTUB04、QUB18、QUB26、QUB11b、MIRU31、MIRU10和MIRU26)作为检测靶标,收集130例肺结核患者和200例非肺结核患者(其他肺部疾病)的痰液样本,分别以传统的罗氏培养法和临床诊断的方法为标准,用MIRU-VNTR分析和荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)对上述样本进行检测。结果:以罗氏培养法为标准时,MIRU-VNTR的灵敏度为93.1%,特异度为97.7%;FQ-PCR检测的灵敏度为94.0%,特异度为96.7%,MIRU-VNTR分析与FQ-PCR检测结果准确度差异无统计学意义(χ2=0.352,P=0.569)。以临床诊断为标准时,MIRU-VNTR分析的灵敏度为86.9%,特异度为100%;FQ-PCR检测的灵敏度为87.7%,特异度为99.0%,两种方法检测结果准确度差异无统计学意义(χ2=0.030,P=0.862),且MIRU-VNTR分析中未发现假阳性结果。在MIRU-VNTR检测为阳性的结果中,98.2%(111/113)的样本分子编码互不相同,只有1.8%(2/113)分子编码一致(皆为5-4-6-8-5-5-3-8)。结论:应用临床痰液标本建立的基于MIRU-VNTR的结核分枝杆菌快速检测方法有着较好的应用价值。